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            磺胺類藥物殘留檢測方法




            磺胺類藥物是一種具有對氨基苯磺酰胺結構的抗生素,具有廣譜抗菌效果,廣泛應用于畜牧生產行業。過度使用磺胺類藥物飼養會通過動物食可用組織積累在人體內,有嚴重副作用和致癌性,對人體健康造成損害。我國規定所有使用動物的肌肉、脂肪肝、腎臟食品中磺胺類藥物的最大殘留量為0.1 mg/kg。因此對于可食用動物組織中的磺胺類藥物殘留的檢測技術極其重要。

            磺胺類藥物檢測方法主要有液相色譜法、液相色譜-串聯質譜法、酶聯免疫發等。其中2014年農質發發布的檢測方法中以高效液相色譜法為檢測標準,目前許多檢測實驗室開發了液相色譜-串聯質譜法進行樣品中磺胺類藥物的殘留,提高了檢測方法分辨率和檢測結果的準確性。目前以官方權威的高效液相色譜法為例,對完整實驗過程和所需試劑和儀器設備進行介紹,液相色譜-質譜儀聯用方法也會在文末補充質譜儀設置參數。



            磺胺類藥物殘留檢測方法

            可食用動物組織磺胺類藥物殘留檢測實驗流程

            1.試劑配置
            配置95%、80%乙腈溶液(含0.2%甲酸),配置標準液儲備液1mg/mL,梯度稀釋配置樣品工作液,配置完成后保存。
            2.樣品前處理
            取檢測樣品和對照樣品利用高速分散器(高速勻漿機)對樣品進行均質分散,利用超聲波細胞粉碎機對細胞進行進一步破碎,完全釋放出細胞內含物。

            我們新芝為客戶提供兩種能夠進行組織分散儀器,S10手提式高速勻漿機以及XHF-DY高速分散器分別能夠故處理小體積(1-120mL)和大體積(3-1000mL)處理量,供需選擇。同時提供超聲波細胞粉碎機SCIENTZ-IID進行(0.5-600mL樣品量)細胞的破碎處理。

            下圖是具體性能和參數:

            2  S10手提式高速勻漿機性能圖

            3  XHF-DY高速分散器性能圖


            4  超聲細胞破碎儀性能


            3.標準曲線繪制
            分別準確量取磺胺類藥物標準品工作液,用梯度稀釋成濃度為0.05、0.1、0.5、1.0、5.0μg/mL(流動相稀釋)系列混合標準溶液并進行測量,繪制標準曲線
            4.提取
            稱取試料5±0.05g50 mL離心管中,加入無水硫酸鈉4 g,乙腈15 mL,以10000r/min以上的速度均質60 s后,以5000 r/min速度離心5 min,將上層溶液轉移到另一離心管中,下層殘渣加乙腈15 mL,渦旋混勻1 min,5000 r/min速度離心5 min,合并兩次的上清液于同一離心管中,加正己烷10 mL,振蕩5 min,靜置或離心分層后,取下層液體,加入正丙醇5 mL,50℃氮吹干,加95%乙腈溶液3 mL,渦旋混合1 min,超聲萃取2 min,作為備用液。

            新芝能夠為客戶提供高速冷凍離心機HSC-2015LHSC-3020L兩款,其中HSC3020L是前一款的升級款。提供DT系列的超聲波清洗機,助力超聲萃取,提高檢測準確度。同時可應用于超濾和液相檢測前脫氣功能:


            5  高速冷凍離心機性能圖

            6  超聲清洗機性能圖

            5.樣品凈化
            95%乙腈溶液3mL活化堿性氧化鋁小柱,將上述備用液全部過柱。用95%乙腈溶液5mL滌雞心瓶后過柱,不收集,擠干或負壓抽干柱子里的液體,用80%乙腈溶液10mL洗脫,收集洗脫液,加入正丙醇5 mL后,50℃氮吹干,準確加入流動相溶解2.0mL,渦旋混合1 min,超聲2 min,過0.22μm濾膜后,取濾液上機分析。
            6.測定
            高效液相色譜參考條件
            色譜柱: C18,250mm×4.6mmi.d.),粒徑5μm,或相當者;
            流動相:乙腈-甲醇--冰乙酸(2+2+9+0.2);
            流速:1mL/min;
            檢測波長:270nm;
            進樣量:20μL;
            柱溫:30 ℃
            質譜儀參考條件(AB SCIEX API 4000+質譜聯用儀)
            電噴霧離子源(ESI):正離子電離模式;
            去溶劑溫度:550 °C;
            氣簾氣壓力:172 kPa;
            碰撞氣壓力:41 kPa;
            離子氣1壓力:414 kPa;
            離子氣2壓力:379 kPa;
            噴霧電壓:5500 V;
            掃描方式:依賴保留時間的多反應監測(scheduled MRM
            7.結果計算和表述

            以上,就是我們新芝生物能為磺胺類藥物殘留檢測實驗提供的儀器清單,供需查詢。詳情請登錄我們的官方網頁www.wxyccw.com


            參考文獻
            1. 通過型固相萃取凈化-超高效液相色譜-串聯質譜法檢測雞肉中23種磺胺類藥物殘留
            2. 超高效液相色譜超高效液相色譜串聯質譜法同時快速檢測雞蛋中7676種藥物殘留量的研究種藥物殘留量的研究
            3. 飼料中磺胺類藥物檢測方法研究
            4. 農質發(2014)5號文件-磺胺類藥物在動物可食性組織中殘留的
            高效液相色譜檢測方法
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